Выделение РНК без ядовитых реактивов
Учёные из МГУ разработали новый метод выделения РНК из вирусов, бактерий, растений и животных
Пресс-служба МГУ
Главной задачей при выделении РНК всегда было избавление ее от белка. Этот процесс называется депротеинизация. Для выделения РНК из вирусов, бактерий и высших организмов применяют вещества, вызывающие разрушение сложных клеточных и вирусных комплексов, в которых находится РНК. Для этой цели наиболее частым было использование поверхностно активных веществ и фенола. Их сочетание позволяет выделить РНК практически из всех вирусов и клеток живых организмов. Нуклеиновые кислоты при этом переходят в водный раствор, а с каждой экстракцией 80% белка экстрагируется в фенол.
В конце 80-х гг. Петр Хомчински и Николет Сакхи для выделения суммарной РНК (клеточной и вирусной) предложили эффективную одноступенчатую обработку клеток раствором смеси гуанидинтиоцианата, вызывающего распад комплексов РНК с белками, и фенола с хлороформом (фирменное название смеси – TRIzol). Используемые в методе реагенты – гуанидинтиоцианат, фенол и хлороформ – очень токсичны.
В связи со стремительным развитием биотехнологий выделение РНК приобретает массовый характер. На первый план выходит экологичность методов выделения РНК.
Доктор химических наук, заведующий лабораторией нуклеиново-белковых взаимодействий НИИФХБ имени А.Н. Белозерского МГУ Юрий Дрыгин предложил использовать для выделения РНК трихлорацетат аммония (ТХАА).
Препараты РНК, полученные из вирусов, E.coli, растений и клеток животных с помощью ТХАА, по физико-химическим свойствам не отличаются от препаратов, выделенных известными раньше методами. Трихлорацетат аммония (ТХАА) не входит в Международный список токсичных веществ, он безвреден для растений, не влияет на клетки животных и человека in vitro и in vivo. Это обстоятельство особенно важно для массового выделения РНК, необходимого, например, для диагностики вирусных инфекций в чрезвычайных обстоятельствах: при массовых заражения растений, животных и людей (эпифитотиях, эпизоотиях и пандемиях).
РНК-полимераза вируса. Источник: InfoCan
В совместной публикации и заявке на грант РФФИ учёные из НИИ физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского МГУ с коллегами из Института технологий биоресурсов в Гималаях (CSIR – Institute of Himalayan Bioresource Technology) на основе разработанного способа развиваются методы выделения и детекции РНК с целью обнаружения вирусов и вироидов многолетних плодовых растений.
Статья Kondakova et al. RNA isolation with low toxic ammonium trichloroacetate была опубликована в European Journal of Biotechnology and Science.
Портал «Вечная молодость» http://vechnayamolodost.ru
11.05.2016