CRISPR/Cas9 с электропорацией яйцеклеток
Найден быстрый способ создания трансгенных мышей
Генетики из Калифорнийского университета усовершенствовали технологию редактирования генома CRISPR/Cas9. Новый метод называется CRISPR-EZ, и он позволяет вставлять в геномы эмбрионов мышей новые молекулы ДНК с почти стопроцентным успехом. Результаты исследования опубликованы в Journal of Biological Chemistry (Chen et al., Highly Efficient Mouse Genome Editing by CRISPR Ribonucleoprotein Electroporation of Zygotes).
Суть нового подхода заключается в применении электропорации. Чтобы система CRISPR/Cas9 имела возможность внести изменения в ДНК, ее вводят через микроскопическую иглу в оплодотворенные яйцеклетки. Небольшой электрический разряд позволяет сделать тонкое отверстие в мембране, через которое молекулы системы попадают в клетку.
В своем эксперименте ученым удалось внести мутацию в ген у 88 процентов мышей. Это число превышает количество генно-модифицированных мышей, полученных с помощью метода CRISPR-редактирования, в котором используются обычные инъекции. По словам ученых, их разработка позволяет значительно улучшить жизнестойкость эмбрионов, которые иногда умирают из-за генетических манипуляций или рождаются с отклонениями.
CRISPR-EZ позволяет уменьшить затраты сил и времени на получение мышей с нокаутированными (дефектными) генами.
Для создания трансгенных животных используют экстракорпоральное оплодотворение. Сначала самку с помощью гормональных инъекций подготавливают к спариванию, после чего ученые извлекают оплодотворенные яйцеклетки. В них через тонкую иглу вводят систему CRISPR/Cas9. Она состоит из двух типов молекул РНК информационной РНК, которая кодирует белок cas9, и гидовой РНК, которая соединяется с участком гена мыши и указывает cas9, где нужно осуществить разрез ДНК.
Рисунок из пресс-релиза UC Berkeley Faster, more efficient CRISPR editing in mice – ВМ.
Портал «Вечная молодость» http://vechnayamolodost.ru
30.05.2016