Подписаться на новости
  • Сенатор
  • ООО "Ай Вао"
  • Биомолтекст2020
  • vsh25
  • Vitacoin

Репрограммированные клетки, подтвердите свою плюрипотентность!

Согласно исследованию, результаты которого опубликованы 11 октября в on-line версии Nature Biotechnology в статье «Live cell imaging distinguishes bona fide human iPS cells from partially reprogrammed cells», ученым следует уделять больше внимания идентификации плюрипотентности репрограммированных человеческих клеток. Авторы работы формулируют строгие молекулярные критерии плюрипотентности, отдельно подчеркивая, что использование только одного маркера в данном случае совершенно неприемлемо. Кроме того, в статье можно найти детальное описание методов, наиболее подходящих для выполнения поставленной задачи.

Ученые все более совершенствуются в превращении взрослых клеток человека в стволовые клетки, обладающие свойствами, сходными со свойствами эмбриональных клеток, – так называемые индуцированные плюрипотентные стволовые клетки(иПСК). Однако доказать, что получаемые в результате клетки действительно достигли нужного уровня плюрипотентности, зачастую достаточно сложно. Экспериментаторы, работающие с мышиными клетками, используют молекулярные метки, интегрированные в ассоциированные с плюрипотентностью гены, такие как Fbx15, Oct4 или Nanog. Адекватных аналогов для работы с клетками человека на сегодняшний день, к сожалению, не найдено. По словам одного из авторов, Джорджа Дали (George Daley) из Гарвардского Института стволовых клеток, очевидно, что визуального изучения клеток под микроскопом совершенно недостаточно; кроме того, традиционные маркеры плюрипотентности также могут вводить в заблуждение.

С помощью методов визуализации живых клеток авторы проследили изменения экспрессии различных маркеров плюрипотентности в ходе процесса репрограммирования и дали характеристику выделенных ими типов клеток на основании их морфологии и молекулярных характеристик. В каждую лунку планшета в начале эксперимента поместили десятки тысяч человеческих фибробластов, практически все из которых в результате сформировали колонии, морфологически неотличимые от эмбриональных стволовых клеток. Однако серия проведенных in vitro и in vivo тестов показала, что лишь небольшое количество получившихся в результате клеток действительно были плюрипотентными.

На основании результатов визуализации авторы разделили все колонии, морфологически не отличающиеся от колоний эмбриональных стволовых клеток, на три типа, получившие названия типы I, II и III. Клетки всех трех типов ввели иммунодефицитным мышам для тестирования их способности формировать тератомы (опухоли, состоящие из всех типов тканей человека) – этот метод является одним из «золотых стандартов» тестирования плюрипотентности человеческих стволовых клеток. В результате клетки II и III типа сформировали опухоли, клетки которых дифференцировались в ткани разных зародышевых слоев. Степень наблюдаемой дифференциации варьировала, однако в любом случае она является признаком определенной степени плюрипотентности. В то же время ряд эпигенетических факторов, в том числе гипометилирование генов-промотеров для NANOG и OCT4, а также гистоновые модификации, характерные для плюрипотентного состояния, были обнаружены только в клетках III типа.

По словам одного из авторов, биолога из Бостонской детской больницы Торстена Шлегера (Thorsten Schlaeger), целью проведенной работы является демонстрация всем исследователям, работающим с индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками, необходимости тщательной многоэтапной проверки их плюрипотентности, включающей тесты на способность к формированию тератом, а также изучение эпигенетических признаков и экспрессии генов. Это достаточно сложно, однако необходимо для избежания проблем, недоразумений и противоречащих результатов.

Евгения Рябцева
Портал «Вечная молодость» http://vechnayamolodost.ru по материалам The Scientist: How to ID human pluripotency.

21.10.2009

Читать статьи по темам:

индуцированные плюрипотентные стволовые клетки репрограммирование клеток Версия для печати
Ошибка в тексте?
Выдели ее и нажми ctrl + enter
назад

Читать также:

Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки: еще один шаг

Ученым удалось вернуть дифференцированным стволовым клеткам человека характеристики эмбриональных клеток с помощью единственного фактора транскрипции.

читать

Плюрипотентные стволовые клетки: еще один источник

Специалисты из Германии сумели превратить зрелые клетки, взятые из семенников мышей, в плюрипотентные стволовые клетки, не прибегая к искусственному внедрению новых генов и использованию вирусов.

читать

Репрограммирование клеток: белки вместо генов

В своей публикации ученые отмечают, что полученные ими «белково-индуцированные плюрипотентные стволовые клетки», как и их классические аналоги, способны вновь переходить в специфическое состояние и формировать ткани развивающихся эмбрионов мышей.

читать

Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки: фибробласты не обязательны

Для создания индуцированных плюрипотентных стволовых клеток ученые воспользовались гемоцитобластами, предшественниками всех типов клеток крови. В процессе культивирования ученые методом трансдукции внедрили в них факторы перепрограммирования – гены, экспрессия которых наблюдается у эмбриональных стволовых клеток.

читать

Аденовирусы перепрограммируют соматические клетки в плюрипотентные

Аденовирусное перепрограммирование клеток намного менее эффективно, чем при использовании ретровирусов. Но при этом ни в одном случае не появилось опухолевых образований, а геномы получившихся плюрипотентных клеток не имеют вирусных вставок.

читать